为了使ISO与其它非异黄酮成分分开，以期得到高纯度的ISO和ISO中的相关单体化

合物，有必要对ISO的粗提物进一步分离纯化。目前ISO的纯化方法主要有传统柱色

谱法、大孔吸附树脂法、高速逆流色谱法、固相萃取、膜分离技术等。 2.1传统柱色谱法　

硅胶柱、聚酞胺柱及葡聚糖凝胶柱色谱在分离纯化中药有效成分中广泛应用，它

们同样也可用于大豆异黄酮的分离纯化。姚开等比较了这三种不同柱层析法对ISO

主要单体的分离效果，采用300～400目硅胶，用氯仿和甲醇以5:1的混合溶液洗脱

可使染料木苷、大豆苷、染料木素和大豆素4种单体组分分离；采用聚酰胺柱层析

时，用不同浓度的甲醇洗脱，可得到极性较大的结合型ISO，含量分别为85．3%的

大豆苷和87.0%的染料木苷；采用LH-20葡聚糖凝胶柱，用90%甲醇作洗脱剂，可得

到含量高达95%以上的大豆苷和染料木苷。徐德平等分别对ISO进行乙酸乙酯和正丁

醇萃取后，将乙酸乙酯部分进行硅胶柱层析，用氯仿、乙醇梯度洗脱，可得到大豆

素和染料木素；将正丁醇部分进行Sephadex LH-20柱层析，用甲醇、水洗脱，可得

到大豆苷和染料木苷。但实验中都需要反复上柱，操作较为烦琐。在ISO的体内代

谢研究中，也可应用传统柱色谱法富集后检测，Satu-Maarit等应用Sephadex LH-

20对ISO的体内代谢产物进行纯化，检测到原形大豆异黄酮和其新的代谢产物。

2.2大孔吸附树脂法　

由于采用硅胶柱层析和葡聚糖凝胶柱层析时，多使用有毒性的有机溶剂且操作过程

较为复杂，因此目前大多选择大孔吸附树脂柱层析来分离纯化ISO，它具有选择性

好、解吸容易、无毒、无污染等优点。潘廖明等比较了9种不同型号的弱极性大孔

吸附树脂对ISO的吸附性能。研究表明LSA-8型树脂对ISO具有较好的选择性和解吸

能力，该树脂在35℃时，对ISO有较好的吸附效果，其动态最大吸附量为204.6 mg

/g干树脂，采用70%乙醇溶液解吸5 h，ISO的含量达到57.0%，比原来提高了4.8倍

。郭文勇等研究了采用大孔吸附树脂分离、纯化淡豆豉中ISO的工艺，比较了7种大

孔树脂对大豆素的吸附性能，结果表明，905型大孔吸附树脂对大豆素的吸附性能

优于其它，在pH＝5.0，温度为室温时，大豆素得率大于

8％。

2.3　高速逆流色谱法

　高速逆流色谱法(HSCCC)是一种不需固态载体的液液分配色谱技术，该技术与传

统方法比较具有分离效率高、操作简便、可避免因不可逆吸附而引起的样品损失等

无可比拟的优

点，因此已被广泛应用于天然产物有效成分的分离制备当中。目前在HSCCC中用来

对ISO中各成分进行分离的溶剂体系有氯仿-甲醇-水（4:3:2，v/v），主要用于分

离制备极性较小的异黄酮，如glycitein、daidzein、acetylgenistin、acetylda

idzin;氯仿-甲醇-正丁醇-水（4:3:0.5:2, v/v）主要用于分离制备极性稍大的异

黄酮，如genistin、glycitin、daidzin;而genistin和glycitin,则可使用甲基叔

丁基醚-四氢呋喃-0.5%三氯醋酸-水（2:2:0.15:4，v/v）的溶剂体系分离得到。也

有报道，使用正己烷-乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-醋酸-水（12:1:1:5:1，v/v）的溶剂

体系，可从3 g ISO粗提物中一次分离得到203 mg daidzin, 241 mg genis-tin，

158mg 6"-0-malonyldaidzin，135mg 6"-0-malonyl-genistin，纯度均在90%以上

，以上表明HSCCC

适合于ISO中各单体成分大规模的生产制备。

2.4 固相萃取

　 固相萃取（SPE）技术是由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来的预处

理技术，用SPE可以有效地将分析物与干扰组分分离，Mauricio等对大豆样品进行

了固相萃取，并将样品在8种不同SPE填料中进行了回收率比较，结果显示，使用S

trata X填料，ISO中各成分回收率最高，平均回收率为99.37%，并且具有污染小、

可处理小

体积试样等优点，可用于大豆产品中异黄酮的分离纯化。但SPE具有多步操作、样

品前处理时间较长等缺点。固相微萃取（SPME）是集采样、萃取和富集于一体的新

的样品前处理方法，该方法样品用量少，灵敏度高。Mary等采用固相微萃取与高效

液相色谱联用技术对生物样品中的大豆素和染料木素进行了检测，并讨论了测定模

式、萃取头、萃取时间、解吸时间等对萃取效率的影响。结果发现:使用CW-TPR的

效果最好，萃取5 min、解吸6 min时

即达到检测要求，大豆素和染料木素的最低检测限分别为25.4 pg/mL和2.70 pg/m

L,均低于使用其它方法测得的检测限浓度。可见，SPME可用于生物样品中微量ISO

成分的分离纯化。

2.5膜分离技术　

膜分离技术(MS)是近年来迅速崛起的一项新技术，它作为一种新的分离纯化和浓缩

方法，具有耗能低、分离效率高、无二次污染、工艺简单等优点。Lei等采用超滤

和渗滤相结合的方法从豆制品加工废液中回收ISO，超滤技术将蛋白质等大分子物

质截留，使ISO等低分子物质和盐类随水分子一起透过膜孔，结合渗滤技术后，使

ISO的纯度和收率提高，再通过反渗透技术将ISO浓缩，最终ISO的回收率可以达到

50%以上。本方法也可以用于从脱脂大豆产品中回收ISO。

3结语

天然产物的提取方法正向着操作简便、高效率、无污染的方向发展。ME、SE、SFE

、HSCCC、MS、SPE等技术为ISO的提取、分离及纯化提供了有力的手段。随着现代

新型技术的涌现，天然产物中的ISO成分将更进一步的被人们所认知并加以开发利

用。

技术的确是花样繁多，但是目前的国内生产水平来看，大多数生产者都会选择成本

较低的技术，一些成本较高的技术设备的添置尚需实力和金钱说话。