发布时间:2025-02-08 01:00:21
侵袭(transwell)实验用于评估细胞迁移能力,具体操作如下:
一、实验原理
细胞借助细胞外基质穿过孔隙,从孔内小室迁移到孔外小室外的高营养区域。
二、实验步骤
1、准备24孔板,放置小室,进行紫外照射消毒。
2、在小室上层加入MG胶,培养箱内静置三十分钟。
3、对细胞进行消化计数,离心后用基础培养基重悬。
4、选取五万个细胞,加入小室内。
5、从培养箱取出transwell板,移去上室MG胶,添加完全培养基,培养十二至二十四小时。
6、上室加入PBS,擦拭并冲洗细胞表面,重复两次。
7、将小室放入相应孔内,上室加入PBS,确保湿润。
8、非培养基孔中加入多聚甲醛,固定三十分钟,勿影响底膜。
9、使用PBS洗涤小室两次。
10、配置吉姆萨染色液,每孔加入六百微升,染色三十分钟,期间使用显微镜观察染色效果,调整染色时间。
11、染色完毕,晾干后拍照,确保无重复或重叠视野。
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